大发3dLogo

热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

现在位置首页>实验试剂制品>核酸纯化>DNA提取纯化> 美国ZyGEM微量和高通量DNA快速提取试剂盒

商品编号:49619
分享

美国ZyGEM微量和高通量DNA快速提取试剂盒

价    格:询价

产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:ZyGEM型    号:

状    态:正常点击量:11127

18253171090
联系我时,请说明是在大发3d上看到的,谢谢!

济南欧莱博科学仪器有限公司

联 系 人:李经理

电     话:18253171090

传     真:

等     级: (第 4年)

性     质:生产型,

联系我时请说在大发3d上看到的,谢谢!




微量和高通量DNA快速提取试剂盒 (美国ZyGEM产品):颠覆传统观念的革命化核酸提取产品

产品介绍 美国ZyGEM公司是一家著名生物大发3d公司,凭借其在新西兰研发中心所拥有的独特生物资源,以及从极端环境收集独一无二微生物群的核心大发3d,而处于世界领先地位。ZyGEM团队在国际生物大发3d产业的商业、大发3d与操作上,拥有几十年丰富的经验。目前该公司推出一系列以来自极端环境微生物的新蛋白酶催化反应为基础的DNA提取试剂盒,包括常规prepGEM、法医forensicGEM及牲畜livestockGEM系列产品。

传统的DNA提取方法步骤多,不但增加了工作量,也增加了污染的机会。

Tradition

ZyGEM的DNA提取大发3d采用一种简单的两阶段温度调控法,单一封闭的操作系统,可以降低污染,减小失误。利用标准液体处理系统可以轻易将这个提取大发3d自动化,一般能够在20分钟内得到DNA,以进行PCR。这项大发3d特别适用于少量或微量样本的检测。

ZyGEM

ZyGEM的DNA提取大发3d已用于DNA提取下游的多项检验,包括DNA测序(Sequencing),STR分析、SNP基因定型分析,全基因组扩增(Whole Genome Amplification,WGA),定量PCR,多元或常规PCR,以及质谱分析等。ZyGEM目前服务的客户来自以下领域:生命科学研究,家畜遗传学,农业遗传学,人体身分辨识检验(法医学)等。

因此,ZyGEM DNA快速提取试剂盒呈现了一个完全不同于传统DNA提取的新型方法,中途无需过柱,离心等繁琐步骤,它是基于酶动力学的DNA提取。简单的操作步骤和方法使得任何大发3d层次的大发3d员都能在几分钟内处理好大量样本,通过温度控制,最终得到高质量的DNA,大发3d员甚至可以在半自动化的情况下,每小时平行的提出几板大量的DNA。

  • 高通量
  • 操作简单:无需从DNA中分离抑制物;无需多步骤离心、洗涤、真空抽滤和过柱。您需要的仅仅是一台PCR仪或加热器
  • 防污染安全:单管封闭的操作体系有效降低汽溶胶污染和操作失误,同也降低实验人员暴露各种生化环境所受的危险
  • 节省人力劳力:无需额外增加仪器和人力,可与自动化仪器联机操作,节省大发3d购置
  • 产率:样品使用量少,产量高,结果准确;DNA提取回收率100%
  • 无需纯化:所有的缓冲液和试剂均与PCR兼容,所以不需要下游的纯化步骤。所得的DNA可直接用于其他实验*
  • 微量样本:对于一些样本量很少或者很难处理的样本,如血液、FTA卡存储的血液、烟蒂、昆虫、家蓄耳孔收集物以及指甲碎片、毛囊组织等,也能在最短的时间提取到高质量DNA

产品分类

常规prepGEM血液卡存血液唾液卡存唾液,细菌昆虫组织

法医forensicGEM血液卡存血液,血迹香烟烟蒂唾液唾液储存卡组织

牲畜livestockGEM:血液储血卡耳孔样本


prepGEM系列产品:

prepGEM™ DNA提取试剂盒是一类简单易行、高通量提取DNA的试剂盒,主要应用于生物医学研究者从各种生物样本中快速提取DNA,然后通过PCR或qPCR进行常规基因型分析。包括昆虫、细菌、真菌、动物血样、动物唾液、动物FTA血卡、FTA唾液卡以及指甲碎片、毛囊等组织样本。
其特点表现在:

  • 很适用于小鼠、昆虫及人类医学临床研究
  • 极少的手动操作,简单快速
  • 基于酶动力学的DNA提取
  • 每个实验操作步骤仅需控制温度
  • 仅需两次手动液体加样操作
  • 高温下酶的催化活性保证有效地去除蛋白,以便下一步更好地进行PCR检测
  • 大部分实验操作均无需离心
  • 高自动化操作
  • 高产率
  • 所得的DNA极少有化学物质的污染,因此对于一些痕量样本,可以在PCR中增加模板DNA用量

1.血液:prepGEM™ Blood DNA提取
prepGEM™ Blood 是一种简单酶动力的DNA提取系统,适合于高通量的基因型研究应用。

  • 此试剂盒优化的方法只需30分钟就可得到DNA
  • 不需要离心,清洗,真空抽离或过柱等多于的步骤
  • 此方法在密闭的管中自行进行。
  • 所有的缓冲液和试剂和PCR兼容,所以不需要下游的纯化步骤。

prepGEM™ Blood这些特性非常适合大规模自动化提取。简单的操作步骤和方法使得任何大发3d层次的大发3d员都能在几分钟内得到大量高质量的DNA。大发3d员甚至可以在半自动化的情况下,每小时平行的提出几板大量的DNA 。
工作流程
Workflow

提取方法
此方法建议从动物全血中直接提取DNA。在一个热循环器中,或水浴槽中孵育,或使用带有机器手臂的温度控制加热器。
样品的制备
所有的操作应在干净的房间或PCR罩内进行。使用DNA-free的离心管和试剂,在0.05%次氯酸盐中漂洗表面可能接触到的样品。再用DNA-free水彻底冲洗。

1. 在一个PCR单管中加入:

  • 86.5 µl的PCR级水
  • 10 µl的10x buffer红色
  • 2.5 µl的液体血液
  • 1 µl prepGEM™

对于EDTA 保存的血液,加入 2 µl 的10 mM CaCl2 。紫色
2. 75°C 孵育15分钟。
3. 95°C孵育15分钟。这一步使用热循环仪(PCR仪)
4. 高速离心2分钟。.
5. 吸取上情。
通常在新鲜血液中能获得大约0.5 ng / µl DNA。

大发3d提示

  • prepGEM™ Blood流程可以使用液体加样自动工作站或手动工作站。 
  • prepGEM™ Blood 是DNA提取的制备方法,不是一个纯化的过程。它的目的是裂解细胞,分离出核蛋白中DNA。提取的DNA可以应用SNiPs, STRs,定量的,多元的和常规PCR应用。
  • qPCR可以准确的评估产量。由 prepGEM™ 提取的DNA大约90%都是单链的。如果定量时用到标准的荧光鳌合染料,这个因子应该考虑进去。
  • 像其他核酸提取的制备方法一样,为了得到最好的结果,提取前或提取后,样品放在4℃或冰上。
  • 提取后储存样品时,从沉淀的残渣中吸走上清,分别保存。
  • 如果从含有EDTA的血液中提取的DNA, 要加入终浓度200 µM 的CaCl2来提高酶的的活性。
  • prepGEM™ 在4℃可以保存30天,对于长时间储存,应放在-20℃中。
  • 对提取的DNA长时间的保存,应加入1xTE缓冲液并储存在-20℃中。

    返回

2.卡存血液: prepGEM™ Storage card Blood DNA提取
prepGEM™ Storage card blood 是专门针对FTA卡存储的动物血样DNA提取而设计的,尤其适用于大宗犯罪样本的高通量自动化提取,整个程序可用96孔板轻易自动完成,由于是单管封装操作,也保证样本在提取过程中的完整性。
· 优化的方法,能在30分钟内快速得到DNA。
· 不需要反复的离心,洗涤,真空抽滤,过柱等。
· 所有的试剂均与PCR兼容。
· 封闭管中,反应自动进行。
工作流程
C:\DOCUME~1\ADMINI~2.TOM\LOCALS~1\Temp\ksohtml\wps_clip_image-2166.png
样品准备
所有的操作应在干净的房间或PCR罩内进行。使用DNA-free的离心管和试剂,在0.05%次氯酸盐中漂洗表面可能接触到的样品。再用DNA-free水彻底冲洗。
1.从卡储存的样品中取走一个或两个1.2mm小片,放在细小的PCR管中或96孔板中。
为了得到最好的结果,取样品所在的中央区域。
2. 用100 µl 的DNA-free水清洗小片并在室温中孵育15分钟。从小片中吸走水分,并弃去。
提取方法
1. 加入:
· 5 µl 的 10x buffer MAGENTA
· 44 µl 的 DNA-free水
· 1 µl prepGEM™
2.75℃孵育15分钟
3.95℃孵育 5分钟。这一步应用到热循环仪。
4. 16,000 x g离心5分钟,转上清到一个新的试管中。
DNA 就在溶液中,不在沉积物中。
现在样品可以定量并分析。通常2-5 µl用于PCR。
大发3d提示
· prepGEM™ Storage Card流程可以使用液体加样自动工作站或手动工作站。
· prepGEM™ Storage Card可以从大部分类型存储卡中提取DNA。它的目的就是裂解细胞,分离出核蛋白中DNA。提取的DNA可以应用SNPs, STRs,定量常规PCR应用。
· 对于含有防腐剂的细胞和DNA存储卡样品,会严重抑制Taq DNA 聚合酶活性。预侵泡的步骤是为了去除这些抑制子,从而到可靠的结果。
· 由于加热的步骤,prepGEM™提取的DNA主要是单链的。如果需要双链DNA,95℃变性这步可以省去,下游的纯化过程可以使用。
· qPCR可以准确的评估产量。由prepGEM™提取的DNA大约90%都是单链的。如果定量时用到标准的荧光鳌合染料,这个因子应该考虑进去。
· 像其他核酸提取的制备方法一样,为了得到最好的结果,提取前或提取后,样品放在4℃或冰上。
· 提取后储存样品时,从卡上吸走上清。
· prepGEM™在4℃可以保存30天,对于长时间储存,应放在-20℃中。
· 对提取的DNA长时间的保存,应加入1xTE缓冲液并储存在-20℃中。

返回

3.唾液: prepGEM™ Saliva DNA提取
prepGEM™ Saliva 是专门用于实验室、生物医学单位收集的口腔咽拭子样本,液态唾液样本的DNA提取的试剂盒。25分钟内便能得到DNA,可用于多重分析,包括PCR,如定量PCR,SNP检测及基因型分析。通常提取液中DNA产量可达0.5-2 ng/µl。
工作流程
C:\DOCUME~1\ADMINI~2.TOM\LOCALS~1\Temp\ksohtml\wps_clip_image-4684.png
操作程序
C:\DOCUME~1\ADMINI~2.TOM\LOCALS~1\Temp\ksohtml\wps_clip_image-4691.png
实验结果
C:\DOCUME~1\ADMINI~2.TOM\LOCALS~1\Temp\ksohtml\wps_clip_image-4698.png
 Cultiplast药签上的唾液样品用prepGEM™ Saliva提取DNA,进行荧光定量PCR。红色表示标准品((5.5 ng/ µl; 1.85 ng/µl; 0.620 ng/µl; 0.210 ng/µl; 0.068 ng/µl; 0.023 ng/µl),蓝色表示样品。30秒内我们收集好了样本,并参考说明书的方法概要进行DNA提取。每个PCR重复2次,20µl的反应体系,加2µl模板DNA。

返回

4.卡存唾液: prepGEM™ Storage card Saliva DNA提取
prepGEM™ Storage card Saliva是专门针对FTA卡存储的人唾液DNA提取而设计的,并且能够克服某些大发3d存储卡含PCR抑制因子的缺点。所得的DNA适用于PCR分析,包括定量PCR,STR-PCR检测及其它基因型分析等。
工作流程
C:\DOCUME~1\ADMINI~2.TOM\LOCALS~1\Temp\ksohtml\wps_clip_image-5075.png
操作程序   
C:\DOCUME~1\ADMINI~2.TOM\LOCALS~1\Temp\ksohtml\wps_clip_image-5083.png
实验结果
C:\DOCUME~1\ADMINI~2.TOM\LOCALS~1\Temp\ksohtml\wps_clip_image-5090.png
Whatman FTA指示微量卡存储的唾液样品用prepGEM™ Storage card Saliva提取DNA,进行荧光定量PCR。红色表示标准品((5.5 ng/µl; 1.85 ng/µl; 0.620 ng/µl; 0.210 ng/µl; 0.068 ng/µl; 0.023 ng/µl),蓝色表示样品。Whatman FTA指示微量卡存储的5个唾液样品供提取DNA。取2mm直径的小孔,参考说明书的方法概要进行DNA提取。每个PCR重复2次,25µl的反应体系,加5µl所提取的DNA。

返回

5.prepGEM™ Bacteria DNA提取
prepGEM™ Bacteria 基于酶催化反应来提取DNA,单管封装操作,适用于多种革兰氏阳性菌和阴性菌。此试剂盒应用特殊的洗涤缓冲液和提取缓冲液,通过连续的温度调控的酶催化反应,裂解细胞从而得到DNA。它被证实能从30多种细菌中提取高质量的DNA,最短在25分钟内完成,足够下游的PCR检测。所得的DNA可用于PCR,定量PCR,STR-PCR,同时也被验证用于琼脂上的克隆系,液体细菌培养,生物医学的药签准备等。
工作流程

C:\DOCUME~1\ADMINI~2.TOM\LOCALS~1\Temp\ksohtml\wps_clip_image-1821.png

操作程序
C:\DOCUME~1\ADMINI~2.TOM\LOCALS~1\Temp\ksohtml\wps_clip_image-1827.png


实验结果
C:\DOCUME~1\ADMINI~2.TOM\LOCALS~1\Temp\ksohtml\wps_clip_image-1834.png
1% 琼脂凝胶电泳图 用prepGEM Bacteria从24种不现种类的革兰氏阳性菌和阴性菌中提取的DNA,进行16S rRNA基因的扩增。所有样本的操作均参考说明书的方法概要进行。

返回

6.昆虫: prepGEM™ Insect DNA提取
prepGEM™ Insect 是专门应用于从整体或局部昆虫提取高质量DNA的试剂盒。所得的可直接进行PCR的DNA,降低了各种化合物的抑制,可用于限定的PCR程序,尤其适用于条形码大发3d,测序,SNP分析等。
· 简易的方法,20分钟内便可得到DNA。
· 封闭管中,反应自动进行。
· 均与PCR兼容,所以不需要下游的纯化步骤。
prepGEM™ Insect适用于环境监测项目的大规模自动化操作。其简易的步骤和方法可借助大多数液体操作平台而实现全自动或半自动。这样可以不用坚守在操作台,无需覆盖物地孵育,每天并行处理上千样品。
工作流程

提取方法
下述是一般的操作流程。不同的样品类型处理会有略微的差异。
样品的制备
所有的操作应在干净的房间或PCR罩内进行。使用DNA-free的离心管和试剂,在0.05%次氯酸盐中漂洗表面可能接触到的样品。再用DNA-free水彻底冲洗。
1. 整个或局部昆虫放进一个PCR管中。大约用整个组织的1-2 mm。
2. 加入::
· 35 µl 的PCR 级水
· 4 µl 的10x buffer 黑色
· 1 µl prepGEM™
3. 75°C 孵育15分钟
4. 95°C孵育 5 - 15分钟.
5. 如果需要13,000 x g离心 2分钟
通常,从新鲜昆虫中的到的上清用水1:10稀释,然后取1 µl用于25 µl 体系的PCR中。对于较长时间或降解的样品,不必稀释,加大体积就可以使用。
注意:
1. 对于干躁的昆虫,建议用钳子打断组织,用40µl的1x buffer 3 在 4°C浸泡过夜。次日再加入1 µl prepGEM™,接第三步流程。
2. 对于非常小的昆虫,进一步减少体积。 
3. 大量的材料时要减少用量。这一步的目的是裂解细胞,释放出DNA,剔除核蛋白。过度的消化会释放出更多的抑制子进入溶液。
4. 多数情况下5分钟足以。
5. 自动化提取不需要离心。
大发3d提示
· prepGEM™ Insect流程可以使用液体加样自动工作站或手动工作站。
· prepGEM™ Insect 是DNA提取的制备方法,不是一个纯化的过程。它的目的是裂解细胞,分离出核蛋白中DNA。提取的DNA可以应用SNPs, STRs,定量和常规PCR应用。
· prepGEM™ 提取的 DNA由于加热步骤主要是单链,如果需要双链 95° 可以省略,可以用于下游的纯化步骤。
· qPCR可以准确的评估产量。由prepGEM™提取的DNA大约90%都是单链的。如果定量时用到标准的荧光鳌合染料,这个因子应该考虑进去。
· 像其他核酸提取的制备方法一样,为了得到最好的结果,提取前或提取后,样品放在4℃或冰上。
· 提取后储存样品时,从沉淀的残渣中吸走上清,分别保存。
· 依据样品中昆虫的类型和它们干躁的情况,打磨或水化以达到最佳的产量。
· 样品中加入EDTA会减小酶的活性。加入 CaCl2,使终浓度达到200 µM,会克服这个问题。
· prepGEM™ 在4℃可以保存30天,对于长时间储存,应放在-20℃中。
· 对提取的DNA长时间的保存,应加入1xTE缓冲液并储存在-20℃中。

返回

7.组织: prepGEM™ Tissue DNA提取
prepGEM™ Tissue是适用于从多种动物组织中简易快束提取高质量的DNA,包括肌肉、脂肪、小鼠尾巴、鱼鳍等。所得的DNA适用于PCR分析,包括定量PCR,SNP-检测及常规基因型分析等。
· 简易优化的方法,不到20分钟便可得到DNA。
· 封闭管中,反应自动进行。
· 所有的缓冲液和试剂均与PCR兼容,所以不需要下游的纯化步骤。
prepGEM™ Tissue适合样本的自动化处理,借助大多数液体操作平台就可实现全自动或半自动。其简易的步骤和方法也可用于人工处理上千个样品,或者单一样品的重复分析。
工作流程

提取方法
下述是一般的操作流程。不同的样品类型处理会有略微的差异。
样品的制备
所有的操作应在干净的房间或PCR罩内进行。使用DNA-free的离心管和试剂,在0.05%次氯酸盐中漂洗表面可能接触到的样品。再用DNA-free水彻底冲洗。


组织类型

操作程序

动物组织(脂肪,肌肉,器官)

把组织切割成大约 1.5 mm3的立方体,用解剖刀捣碎组织后放进薄壁PCR管中。.

毛发毛囊

取毛囊以上5 mm,放进薄壁PCR管中。

小鼠尾巴

放进薄壁PCR管中。

鱼鳍或鱼尾

取约4mm2鱼鳍或鱼尾,放进薄壁PCR管中。

1. 加入:
· 89 µl DNA-free 水
· 10 µl 的 10x buffer 金色
· 1 µl prepGEM™
2. 75°C 孵育15分钟。
3. 95°C孵育5分钟。这一步使用热循环仪(PCR仪)
4. 从组织中吸走提取物。
大发3d提示
· prepGEM™ Tissue可以使用液体加样大发3d而实现自动化。
· prepGEM™ Tissue是DNA提取的制备方法,不是一个纯化的过程。它的目的是裂解细胞,从核蛋白中分离出DNA。所得的DNA可以应用SNPs, STRs,定量的,多元的和常规PCR应用。 
· qPCR可以准确的评估产量。由prepGEM™提取的DNA大约90%都是单链的。如果定量时用到标准的荧光鳌合染料,这个因子应该考虑进去。
· 像其他核酸提取的制备方法一样,为了得到最好的结果,提取前或提取后,样品放在4℃或冰上。
· 抽提完储存样品时,从沉淀的残渣中吸走上清,分别保存。
· prepGEM™ 在4℃可以保存30天,对于长时间储存,应放在-20℃中。
· 提取的DNA长时间的保存,应加入1xTE缓冲液并储存在-20℃中。
实验结果


MT16SF1

ACCCCGCCTGTTTACCAA

MT16SR4

CTGATCCAACATCGAGGTCG

COWF1

CTGGCAAAGTGGACATCGTC

COWF2

TCCATTGATGACGAGCTTCC

图1: 牛脂肪核及线粒体引物的定量PCR检测


L14735

AAA AAC CAC CGT TGT TAT TCA ACT A

H15149

GCI CCT CAR AAT GAY ATT TGT CCT CA

图2: 线粒体引物PCR检测冻存片状鱼指(Hoki),来鉴定物种。

返回


forensicGEM系列产品
forensicGEM™ DNA提取试剂盒系列基于forensicGEM™蛋白酶,是专门针对刑侦物证鉴定样品分析的产品,适合于法医鉴定中标准样本的大规模成批检验,如犯罪样本的高通量DNA提取,包括人的血样、唾液、FTA血卡、FTA唾液卡和烟蒂以及指甲碎片、毛发毛囊等组织样本。所有的试剂均经过了严格的质量管理检验,且与多元STR分析试剂盒兼容。
其特点表现在:
特别适用于刑侦物证鉴定样本分析
l 方法简易,对于痕量样本,使其DNA产量最大化
l 不需要反复的离心,洗涤,真空抽滤,过柱等
l 单管封闭的操作体系,有效降低汽溶胶污染和操作失误
l 每个实验操作步骤仅需控制温度
l 高产率
l 高通量
l 均与PCR兼容,所以不需要下游的纯化步骤

1.血液:forensicGEM™ Blood DNA提取
forensicGEM™ Blood是基于酶催化反应的DNA提取方法,专门针对血液样品的高通量法医检测。
· 试剂盒优化的方法,30分钟内便能得到DNA。
· 血液中普遍存在的PCR抑制物被有效地去除。
· 封装管内自动反应,无需手动。
· 所有的缓冲液和试剂均与商业可用的分析试剂盒兼容,无需纯化DNA。
· 从极少量的样本中也能提取高质量的DNA。
· 不需要反复的离心,洗涤,真空抽滤,过柱等。
forensicGEM™ Blood适合样本大规模的自动化处理,借助大多数液体操作平台就可实现全自动或半自动。简单的操作步骤和方法使得任何大发3d层次的大发3d员都能在几分钟内得到大量高质量的DNA。大发3d员甚至可以在半自动化的情况下,每小时平行的提出几板大量的DNA 。
工作流程

提取方法
此方法建议直接从人的液态血样中提取DNA。在一个热循环器中,或水浴槽中孵育,或使用带有机器手臂的温度控制加热器。
样品的制备
所有的操作应在干净的房间或PCR罩内进行。使用DNA-free的离心管和试剂,在0.05%次氯酸盐中漂洗表面可能接触到的样品。再用DNA-free水彻底冲洗。
1. 在一个薄壁PCR管中加入:
· 86.5 µl 的PCR 级水
· 10 µl 的10x buffer 红色
· 2.5 µl 的液体血液
· 1 µlforensicGEM™
对于EDTA 保存的血液,加入 2 µl 的10 mM CaCl2 。紫色
2. 75°C 孵育15分钟。
3. 95°C孵育15分钟。这一步使用热循环仪(PCR仪)
4. 高速离心2分钟。.
5. 吸取上情。
通常在新鲜血液中能获得大约0.5 ng / µl DNA。
大发3d提示
· forensicGEM™ Blood可以使用液体加样大发3d而实现自动化。 
· forensicGEM™ Blood 是DNA提取的制备方法,不是一个纯化的过程。它的目的是裂解细胞,从核蛋白中分离出DNA。所得的DNA可以应用SNPs, STRs,定量和常规PCR应用。 
· qPCR可以准确的评估产量。由 prepGEM™ 提取的DNA大约90%都是单链的。如果定量时用到标准的荧光鳌合染料,这个因子应该考虑进去。
· 像其他核酸提取的制备方法一样,为了得到最好的结果, 提取前或提取后,样品放在4℃或冰上。
· 抽提完储存样品时,从沉淀的残渣中吸走上清,分别保存。
· 如果从含有EDTA的血液中提取的DNA, 要加入终浓度200 µM 的CaCl2来提高酶的的活性。
· forensicGEM™ 在4℃可以保存30天,对于长时间储存,应放在-20℃中。
· 提取的DNA长时间的保存,应加入1x TE缓冲液并储存在-20℃中。
实验结果
DNA图谱

图1:2.5 µl新鲜血液的实验结果。取1 µl DNA用于PCR。A.forensicGEM™提取的DNA. B.厂商提供的DNA对照. C.未加forensicGEM™.
表1 DNA产量


Table 1

 

Quantiblot

Quantifiler

TOTAL YIELD: ng per µl blood

25.2 ± 7.0

44.1 ± 22.8

CONC. in extract ng /µl

0.6 ± 0.2

0.82 ± 0.46

forensicGEM™所得的产量分别用点阵大发3d与定量PCR计算。样本量为 2.5 µl血液 ,最终提取液为100 µl 。
· QIAGEN试剂盒,2ml(每1ml包含2.5x 105白细胞)血液能提取3µg DNA,相当于1.5ng DNA/µl 血液。
· Chemagen试剂盒,3ml血液能提取60-120 µg DNA,相当于20-40ng DNA/µl 血液。

图2: forensicGEM™ 血液样品DNA,扩增曲线。蓝色:四个血液样品。红色:DNA标准品。
DNA产量

图3:单独的4个血液样品用forensicGEM™及其它提取方法提取的DNA产量。误差线为标准偏差。
注:苯酚方法用20µl 血液,200µl容器中用蛋白酶K处理。提取中用到酚,酚/氯仿/异戊醇25:24:1,氯仿。样品用乙醇洗涤,并溶于50µl TE溶液中。
其它方法根据各自厂商说明略有不同。

返回

2.
卡存血液:forensicGEM™ Storage card Blood DNA提取

forensicGEM™ Storage card Blood 是专门针对FTA卡存储的人血样DNA提取而设计的,其缓冲液能将血液中的血红素及血红蛋白的抑制因素降到最小。通常FTA卡要求一个预洗的步骤来去除充盈在卡中的抑制子,但forensicGEM™ 方法不需要,简便且易于自动化操作。
· forensicGEM™ 通过了法医鉴定的质量检测和验证。
· 是一种从微量样品中最大限度提取DNA 产量的简易方法。
· 此试剂盒优化的方法只需30分钟就可得到DNA。
· 所有的缓冲液和试剂与一般的试剂盒PCR试剂兼容。
· 密闭管中反应自行进行。
这些特性使得forensicGEM™ Storage Card blood特别适用于大体系的罪犯样品高通量的自动化处理。此流程适合96孔板自动化处理,而且在密闭管中反应的方法确保了整个提取过程中样品DNA的完整性。
工作流程:

样品的制备
所有的操作应在干净的房间或PCR罩内进行。使用DNA-free的离心管和试剂,在0.05%次氯酸盐中漂洗表面可能接触到的样品。再用DNA-free水彻底冲洗。   
从卡储存的样品中取走一个或两个1.2mm小片,放在细小的PCR管中或96孔板中。为了得到最好的结果,取样品所在的中央区域。
用100 ul 的DNA-free水清洗小片并在室温中孵育15分钟。从小片中吸走水分,并弃去。
提取方法
1.加入:
5ul 10x MAGENTA 缓冲液
44 ul DNA-free水
1 ul forensicGEM
2.75℃孵育15分钟。
3.95℃孵育 5分钟。这一步应用到热循环仪。
4.16,000 x g离心5分钟,转上清到一个新的试管中。
DNA 就在溶液中,现在样品可以定量并分析。通常2-5 ul用于PCR。
大发3d提示
· forensicGEM™ Storage Card blood可以从大部分类型存储卡中提取DNA。它的目的就是裂解细胞,从核蛋白中分离出DNA。提取的DNA可以应用SNPs, STRs,定量和常规PCR应用。
· 对于含有防腐剂的细胞和DNA存储卡样品,会严重抑制Taq DNA 聚合酶活性。预侵泡的步骤是为了去除这些抑制子,从而到可靠的结果。
· 由于加热的步骤,forensicGEM™ 提取的DNA主要是单链的。如果需要双链DNA,95℃变性这步可以省去,下游的纯化过程可以使用。
· qPCR可以准确的评估产量。由forensicGEM™ 提取的DNA大约90%都是单链的。如果定量时用到标准的荧光鳌合染料,这个因子应该考虑进去。
· 像其他核酸提取的制备方法一样,为了得到最好的结果,提取前或提取后,样品放在4℃或冰上。
· 提取后储存样品时,从卡上吸走上清。
· prepGEM™在4℃可以保存30天,对于长时间储存,应放在-20℃中。
· 对提取的DNA长时间的保存,应加入1xTE缓冲液并储存在-20℃中。

返回

3.血迹:forensicGEM™ Bloodstain DNA提取
forensicGEM™ Bloodstain是基于酶催化反应的DNA提取方法,专门针对血迹样品的高通量法医检测。
· 从极少量的血迹样本中也能提取高质量的DNA。
· 血液中普遍存在的PCR抑制物被有效地去除。
· 试剂盒优化的方法,30分钟内便能得到DNA。
· 不需要反复的离心,洗涤,真空抽滤,过柱等。
· 封装管内自动反应,无需手动。
· 所有的缓冲液和试剂均与商业可用的分析试剂盒兼容,无需纯化DNA。

返回

4.香烟:forensicGEM™ Cigarette DNA提取
forensicGEM™ Cigarette是专门从香烟中提取高质量DNA的一种试剂盒。
并且能够克服某些大发3d香烟含PCR抑制因子的缺点。其方法简易,在不到25分钟内便可从多种大发3d的香烟中提取到能满足PCR检测的DNA。
· forensicGEM™ 通过了法医鉴定的质量检测和验证。
· 是一种从微量样品中最大限度提取DNA 产量的简易方法。
· 此试剂盒优化的方法,不到25分钟就可得到DNA。
· 所有的缓冲液和试剂与一般的试剂盒PCR试剂兼容。
· 封装管内自动反应,无需手动。
· 保证香烟犯罪样品所得DNA的完整性。
工作流程:

提取的方法
下述是一般的操作流程。不同的样品类型处理会有略微的差异。
样品的制备
所有的操作应在干净的房间或PCR罩内进行。使用DNA-free的离心管和试剂,在0.05%次氯酸盐中漂洗表面可能接触到的样品。再用DNA-free水粗略冲洗。
用少量的DNA-free的水清洗口腔棉棒,水量覆盖住棉棒为准。通常一个棉棒需要400-500 µl水。转动棉棒,使它抵住试管底部,尽可能的挤掉水分。
1. 从烟蒂上取下 1 cm的纸片,剪成四份,作为重复实验分别进行。
2. 把每个样品的纸片切割成小碎片(3 mm squares),放进PCR管中或96孔PCR 板中。.
提取的方法
1. 加入:
· 89 µl DNA-free水
· 10 µl 10x buffer 橙色
· 1 µl forensicGEM™
2. 75℃孵育15分钟
3. 95℃孵育 5分钟。这一步应用到热循环仪。
立刻从纸片上吸走提取物,转移到一个新的试管中。
现在样品可以作定量和分析了。
大发3d提示
·  forensicGEM™ Cigarette可以使用液体加样大发3d而实现自动化。forensicGEM™ Cigarette 是制备DNA的一种方法,不是纯化的流程。它的目的就是裂解细胞,分离出核蛋白中DNA。提取的DNA可以应用SNPs, STRs,定量和常规PCR应用。
· 对于烟蒂,样品间的产量不同。在法医研究时,要想得到足够量的DNA ,简单有效地方法是采用比较新鲜的烟蒂。然而,在一些情况下,还是需要一步浓缩的步骤。
· qPCR可以准确的评估产量。没有足够量的DNA用荧光鳌合的方法鉴定。
· 像其他核酸提取的制备方法一样,为了得到最好的结果,提取前或提取后,样品放在4℃或冰上。
· 提取后储存样品时,从沉淀的残渣中吸走上清,分别保存。
· orensicGEM™ 在4℃可以保存30天,对于长时间储存,应放在-20℃中
· 对提取的DNA长时间的保存,应加入1xTE缓冲液并储存在-20℃中。

返回

5.唾液:forensicGEM™ Saliva DNA 提取
forensicGEM™ Saliva是专门针对从口腔咽拭子中提取DNA的一种试剂盒。
· forensicGEM™ 通过了刑侦方面应用的验证和质控。
· 是一种能从微量样品中最大化的提取DNA的简易方法。
· 简单,快捷的方法能在不足30分钟时间内获得DNA。
· 所有的缓冲液和试剂和一般商用的PCR试剂兼容。
· 封装管内自动反应,无需手动。
采用 forensicGEM™ 唾液提取试剂盒, 大发3d人员利用自动化大发3d可以获得高通量、高质量的DNA ,由于在密闭管中进行,有效地保证了DNA的完整性。

工作流程
 
样品制备
所有的操作应在超净室或PCR操作罩中进行。仅使用可离心的DNA-free 试管和试剂,用0.05%的次氯酸盐漂洗可能接触到样品的表面。再用DNA-free的清水彻底冲洗。
用尽可能少的DNA-free水清洗口腔咽拭子,以覆盖棉棒为宜。通常一个棉棒需要400-500 µl水。转动棉棒,抵住试管壁,尽可能的挤掉水分。
1. 在 PCR管中加入 (在加入下列试剂前摇匀悬浮液):
· 89 µl 的棉棒洗脱液
· 10 µl 的10x buffer 蓝色
· 1 µl 的forensicGEM™
2. 75°C孵育 15分钟。
3. 95°C 孵育 5 分钟。这一步要使用PCR仪。

大发3d提示
· forensicGEM™ Saliva是DNA提取的制备方法,不是一个纯化的过程。它的目的是裂解细胞,分离出核蛋白中DNA。提取的DNA可以应用SNPs, STRs,定量的,多元的和常规PCR应用。
· 此流程没有浓缩的步骤,所以终浓度取决于: 1)采用棉棒的活力。 2)棉棒的类型。 3) 清洗棉棒的缓冲液的体积。我们建议使用最少量的缓冲液清洗棉棒,以获得高浓度的DNA。
· forensicGEM™ 提取的 DNA大部分是单链。如果需要双链DNA, 95°C这步可以省去,可以采用标准的纯化程序。
· qPCR可以准确的评估产量。由forensicGEM™ 提取的DNA大约90%都是单链的。如果定量时用到标准的荧光鳌合染料,这个因子应该考虑进去。
· 像其他核酸提取的制备方法一样,为了得到最好的结果, 提取前或提取后,样品放在4℃或冰上。
· forensicGEM™ 在4℃可以保存30天,对于长时间储存,应放在-20℃中。
· 对提取的DNA长时间的保存,应加入1xTE缓冲液并储存在-20℃中。
实验结果

图1:一个女性口腔咽拭子样品的PCR检测。2µl提取液用于标准PCR验证。
DNA产量

 

Quantiblot

Quantifiler

TOTAL YIELD: ng per swab

175 ± 101.5

235 ± 88.9

CONC. in extract ng /ul

1.8 ± 1.02

2.4 ± 0.89

forensicGEM™所得的产量分别用点阵大发3d与定量PCR计算。样本体积为药签的1/4, 最终提取液为100 µl .
· 在此基础上,一个完整的药签能提取940ngDNA。
· 口腔咽拭子间DNA产量有很大差异,普遍是500-2000ng,QIAGEN试剂盒也是如此。
扩增曲线

图2: forensicGEM™ 口腔咽拭子样品,扩增曲线。蓝色:四个血品。红色:DNA标准品。
DNA产量

图3:单独的4个口腔咽拭子样本用forensicGEM™及其它提取方法提取的DNA产量。误差线为标准偏差。

返回

6.卡存唾液:forensicGEM Storage Card Saliva DNA提取
forensicGEM Storage Card Saliva是专门针对储存在FTA卡上的唾液DNA提取的一款试剂盒。 FTA卡通常应用于刑侦鉴定实验中,用来贮存标准样品,即来源于口腔咽拭子上的唾液样品。
· forensicGEM™ 通过了刑侦方面应用的验证和质控。
· 是一种能从微量样品中最大化的提取DNA的简易方法。
· 简单,快捷。
· 所有的缓冲液和试剂和一般商用的PCR试剂兼容。  
这些特性使得forensicGEM™ Storage Card Saliva特别适用于高通量自动化的大体系的罪犯样品。此流程适合96孔板自动化处理,而且在密闭管中反应的方法确保了整个提取过程中样品的完整性。

工作流程:


样品的制备
所有的操作应在干净的房间或PCR罩内进行。使用DNA-free的离心管和试剂,在0.05%次氯酸盐中漂洗表面可能接触到的样品。再用DNA-free水彻底冲洗。
1.从卡储存的样品中取走一个或两个1.2mm小片,放在细小的PCR管中或96孔板中。
2. 用100 ul 的DNA-free水清洗小片并在室温中孵育15分钟。从小片中吸走水分,并弃去。
储存在卡上的样品不均匀的分布会导致DNA产量的差异。为了得到最好的结果,取所在的中央区域样品。
提取方法
1. 加入:
· 5 µl 的 10x buffer 天蓝色
· 44 µl 的 DNA-free水
· 1 µl forensicGEM™
2.75℃孵育15分钟。
3. 95℃孵育 5分钟。这一步应用到热循环仪。
4. 转移溶液导一个新的试管中。
DNA 就在溶液中,不在沉积物中。
大发3d提示
· forensicGEM™ Storage Card 可以从大部分类型Storage Card中提取DNA。它的目的就是裂解细胞,分离出核蛋白中DNA。提取的DNA可以应用SNPs, STRs,定量的,多元的和常规PCR应用。
· 对于含有防腐剂的卡存DNA样品会严重抑制Taq DNA 聚合酶活性。预侵泡的步骤是为了去除这些抑制子,从而到可靠的结果。
· 由于加热的步骤,forensicGEM™提取的DNA主要是单链的。如果需要双链DNA,95℃变性这步可以省去,下游的纯化过程可以使用。
· qPCR可以准确的评估产量。由forensicGEM™ 提取的DNA大约90%都是单链的。如果定量时用到标准的荧光鳌合染料,这个因子应该考虑进去。
· 像其他核酸提取的制备方法一样,为了得到最好的结果, 提取前或提取后,样品放在4℃或冰上。
· 提取后储存样品时,从卡上吸走上清。
· forensicGEM™ 在4℃可以保存30天,对于长时间储存,应放在-20℃中。
· 对提取的DNA长时间的保存,应加入1xTE缓冲液并储存在-20℃中。

实验结果

 
图1 一个女性口腔咽拭子样品的PCR检测。25µl提取液用于标准PCR验证。

返回

7.组织:forensicGEM™ Tissue DNA提取
forensicGEM™ Tissue 是专门针对一系列法医鉴定组织中提取高质量 DNA的一种试剂盒,包括一般的组织例如指甲碎片和毛囊等。
· forensicGEM™ 通过了刑侦方面应用的验证和质控。
· 酶和缓冲液的结合能从各种组织中释放出高产量的DNA。
· 此试剂盒优化的方法只需20分钟就可得到DNA。
· 所有的缓冲液和试剂与应用一般的试剂盒的PCR试剂兼容。
· 此方法在密闭的管中自行进行。
这些特性使得forensicGEM™Tissue特别适用于大体系的罪犯样品高通量自动化处理,同时手动操作也很容易。密闭管中反应的方法确保了整个提取过程中样品的完整性,也减少了交叉污染和操作者操作失误的机会。
工作流程

提取方法
下面的流程是一般操作流程。不同的样品类型会有轻微的变动。
样品的制备
所有的操作应在干净的房间或PCR罩内进行。使用DNA-free的离心管和试剂,在0.05%次氯酸盐中漂洗表面可能接触到的样品。再用DNA-free水彻底冲洗。
 


组织类型

操作程序

组织 脂肪,肌肉,器官

把组织切割成大约 1.5 mm3的立方体,用解剖刀捣碎组织后放进PCR管中。

毛发毛囊

取毛囊以上5 mm,放进PCR管中。

1. 加入:
· 89 µl DNA-free 水
· 10 µl 的 10x buffer 粉色
· 1 µl forensicGEM™
2.75°C 孵育15分钟。
3. 95°C孵育15分钟。这一步使用热循环仪(PCR仪)
4. 从组织中吸走提取物。
大发3d提示
· forensicGEM™ Tissue可以使用液体加样大发3d而实现自动化。
· forensicGEM™ Tissue是DNA提取的制备方法,不是一个纯化的过程。它的目的是裂解细胞,从核蛋白中分离出DNA。所得的DNA可以应用SNPs, STRs,定量的,多元的和常规PCR应用。
· qPCR可以准确的评估产量。由forensicGEM™提取的DNA大约90%都是单链的。如果定量时用到标准的荧光鳌合染料,这个因子应该考虑进去。
· 像其他核酸提取的制备方法一样,为了得到最好的结果,提取前或提取后,样品放在4℃或冰上。
· 抽提完储存样品时,从沉淀的残渣中吸走上清,分别保存。
· forensicGEM™ 在4℃可以保存30天,对于长时间储存,应放在-20℃中。
· 提取的DNA长时间的保存,应加入1xTE缓冲液并储存在-20℃中。

返回


livestockGEM系列产品
livestockGEM™ DNA提取试剂盒是一类从比较凶悍的动物或者很脏的家蓄的样本中提取DNA的试剂盒,包括各种动物耳孔样本收集物、家畜牛和羊等EDTA处理的血液、Whatman FTA卡储存的血液等。
其特点表现在:

  • 基于酶动力学的DNA提取
  • 从很凶悍或者很脏的动物中快速简易提取DNA
  • 封装管操作,保证样品的完整性
  • 每个实验操作步骤仅需控制温度
  • 高自动化操作
  • 大部分实验操作均无需离心
  • 高产率
  • 适用于多种动物样品

livestockGEM™ Blood这些特性非常适合大规模自动化基因型分析研究。简单的操作步骤和方法可以使用液体加样大发3d而实现全自动或半自动化。这样可以不用坚守在操作台,或平行每天孵育上千中样品,或人工操作上百种样品。
1.血液:livestockGEM™ Blood DNA提取
livestockGEM™ Blood主要应用于从家畜包括牛,羊等EDTA处理的血液中提取高质量的DNA。

  • 此试剂盒优化的方法只需30分钟就可得到DNA。
  • 只需要一步简单的离心,不需要清洗,真空抽离或过柱。
  • 密闭管中反应自行进行。
  • 所有的缓冲液和试剂与PCR及质谱兼容,所以不需要下游的纯化步骤。

livestockGEM™ Blood这些特性非常适合大规模自动化基因型分析研究。简单的操作步骤和方法可以使用全自动或半自动的液体分液器。这样可以不用坚守在操作台,或平行每天孵育上千中样品,或人工操作上百种样品。

返回

2.
卡存血液:livestockGEM™  Storage Card Blood DNA 提取
livestockGEM™ Storage Card Blood 专门针对Whatman FTA卡储存的血液中提取高质量的DNA,主要是家畜物种例如牛,羊等血液中提取DNA。

  • 此试剂盒优化的方法只需30分钟就可得到DNA。
  • 只需要一步简单的离心,不需要清洗,真空抽离或过柱。
  • 密闭管中反应自行进行。
  • 所有的缓冲液和试剂与PCR及质谱兼容,所以不需要下游的纯化步骤。

livestockGEM™ Storage Blood Card这些特性适合大规模自动化基因型分析研究。此方法在密闭管中进行,确保提取过程中样品的完整性:减少了交叉污染和操作失误的机会。
实验结果


图1:几个母牛血样DNA的定量PCR扩增曲线

 


图2:卡存牛血样DNA,GAPDH 基因的两个PCR扩增片段的凝胶电泳

返回

3.
耳孔:livestockGEM™ Ear Punch DNA提取
livestockGEM™ Ear Punch 是针对从一系列物种耳孔样本收集物中提取DNA的试剂盒。

  • 此试剂盒对各种不同的耳孔样本均能简易处理。
  • 大规模自动化操作,节省人力。
  • 密闭管中反应自行进行。
  • 所有的缓冲液和试剂在PCR,质谱中兼容,所以不需要下游的纯化步骤。

livestockGEM™ Ear Punch的这些特性适合对家畜进行大规模自动化基因型分析研究。此方法在密闭管中进行,确保提取过程中样品的完整性:减少了交叉污染和操作者操作失误的机会。.
实验结果


图1:耳孔样本收集物DNA,GAPDH 基因的3个PCR扩增片段的凝胶电泳


图2: 两头母牛耳朵里不同位置采集的20个耳孔样本,定量PCR扩增曲线。不同样本间差异显示很小,表明DNA产量与不同的动物或耳朵的不同取样位置几乎无关。

返回


常规DNA提取试剂盒(加拿大Norgen Biotek产品)

Norgen Biotek是来自加拿大的著名生物大发3d公司,生产基于专利大发3d上的核酸和蛋白质纯化及富集产品。Norgen Biotek 在2003年获得加拿大国家研究委员会颁发的科技创新奖。目前该公司的产品多达40余种,覆盖基因组和蛋白组,广泛地被用于药厂及科研院所研究和新产品开发的各个方面。

Norgen Biotek的DNA纯化产品包括
 

DNA Kits
产品
货号
规格
Plasmid MaxiPrep Kit 15300 4 preps
Bacterial Genomic DNA Isolation Kit 17900 50 preps
Yeast Genomic DNA Isolation Kit 18600 50 preps
Blood Genomic DNA Isolation Kit 18200 50 preps
Genomic DNA Isolation Kit 24700 50 preps
Urine DNA Isolation Kit 18100 50 preps
Endotoxin Removal Kit (Mini) - For DNA 22700 20 preps
Endotoxin Removal Kit (Maxi) - For DNA 21900 4 preps
Saliva DNA Isolation Kit 21410 25 preps
Direct Fungi DNA Isolation Kit 25600 25 preps
Plant/Fungi DNA Isolation Kit 26200 50 preps
Milk Bacterial DNA Isolation Kit 21500 25 preps
Urine Exfoliated Cell DNA Purification Kit 22300 20 preps
Urine Bacteria DNA Isolation Kit 22400 20 preps





猜你喜欢