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商品编号:68955
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RIPA裂解液(中)(SP006)

价    格:132

产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:万生昊天型    号:SP006

状    态:正常点击量:509

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上海万生昊天生物大发3d有限公司

联 系 人:叶小姐

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等     级: (第 4年)

性     质:生产型,贸易型,服务型,

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RIPA裂解液(中)(SP006)

产品简介:
       RIPA裂解液(中)(Medium RIPA Lysis Buffer)是采用一种经典的细胞组织快速裂解并获得总蛋白的裂解液,其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)。所获得的蛋白质可用于Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)等。
Medium RIPA Lysis Buffer主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
 

RIPA裂解液(中)(SP006)


产品组成:

                            编号
名称
SP006
RIPA裂解液(中)100 ml
PMSF(100mM)1.5 ml

 






RIPA裂解液(中)(SP006)


保存条件:

-20度保存,12个月有效。


产品参数

RIPA裂解液(中)(SP006)


产品简介:
       RIPA裂解液(中)(Medium RIPA Lysis Buffer)是采用一种经典的细胞组织快速裂解并获得总蛋白的裂解液,其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)。所获得的蛋白质可用于Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)等。
Medium RIPA Lysis Buffer主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
 

RIPA裂解液(中)(SP006)

产品组成:

                            编号
名称
SP006
RIPA裂解液(中)100 ml
PMSF(100mM)1.5 ml

 






RIPA裂解液(中)(SP006)

保存条件:

-20度保存,12个月有效。



产品介绍

RIPA裂解液(中)(SP006)

注意事项:
1. 去除贴壁细胞的培养液时,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
3. 如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
4. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
5. 溶解RIPA裂解液时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。
6. 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-KB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
7. 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。

RIPA裂解液(中)(SP006)

使用说明:
(一)贴壁培养细胞
1. 取Medium RIPA Lysis Buffer置室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM。
2. 去除贴壁细胞的培养液,用PBS、NS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。
3. 按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入Medium RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解15~30min,通常裂解液作用于细胞1~3秒内,细胞就会被裂解。通常6孔板每孔细胞加入100μl解液已经足够,如果细胞密度很高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl。
4. 10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5. 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1. 取Medium RIPA Lysis Buffer 置室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM。
2. 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
3. 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入Medium RIPA Lysis Buffer 。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
4. 10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5. 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
1. 取Medium RIPA Lysis Buffer 置室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM。
2. 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。
3. 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。
4. 按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15~30min。
5. 步骤3、4亦可以采用如下过程:按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例,加入含有PMSF的Medium RIPA Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,该过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。
6. 10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
7. 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
RIPA裂解液(中)(SP006)

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产品编号产品名称包装
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