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商品编号:73630
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abs9239 Lysis Buffer for WB/IP Assays (Without Enz

价    格:360

产    地:上海更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:absin型    号:abs9239

状    态:正常点击量:119

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爱必信(上海)生物科技有限公司

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等     级: (第 9年)

性     质:生产型,服务型,

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产品介绍

描述

Western及IP细胞裂解液,是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀和免疫共沉淀。使用本裂解液时,用户可以根据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。
Western及IP细胞裂解液的主要成分为Tris-HCl,NaCl,去垢剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
使用本裂解液获得的蛋白样品,如果用于酶活性检测或一些生物小分子的检测,需要测试标准品用本裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线。如果本裂解液对于标准曲线无显著影响,则可以使用本裂解液。
用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂等干扰物质,不能用Bradford法测蛋白浓度。 

别名免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)
使用方法
1、对于培养细胞样品
1)取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。
2)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没
有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200μL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,
使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后,细胞就会被裂解。
3)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200μL
裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多,必需分装成 5~10×105 细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少
量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
4)充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫
沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。
注:裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞加入 100μL 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常
高可以适当加大裂解液的用量至 150μL 或 200μL。
2、对于组织样品
1)取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。
2)把组织剪切成细小的碎片。
3)按照每 20mg 组织加入 100~200μL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加
更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5)充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫
沉淀和免疫共沉淀等操作。
6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品
裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆
器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
性能
保存方法2~8℃保存




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