大发3dLogo

热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

现在位置首页>实验试剂制品>PCR/RT-PCR/qPCR>PCR试剂> Fast EvaGreen qPCR Master Mix 一种既适用于快速循环 qPCR 又适用于高分辨率熔解曲线( HRM )分析的 PCR 试剂盒

商品编号:55402
分享

Fast EvaGreen qPCR Master Mix 一种既适用于快速循环 qPCR 又适用于高分辨率熔解曲线( HRM )分析的 PCR 试剂盒

价    格:询价

产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biotium型    号:

状    态:正常点击量:5397

15665882320
联系我时,请说明是在大发3d上看到的,谢谢!

济南济威生物大发3d有限公司

联 系 人:张经理

电     话:0531-81307925

传     真:

等     级: (第 1年)

性     质:生产型,

联系我时请说在大发3d上看到的,谢谢!




 

Fast EvaGreen qPCR Master Mix 是一种既适用于快速循环 qPCR 又适用于高分辨率熔解曲线( HRM )分析的 PCR 试剂盒。该试剂体系囊括了 PCR 领域的两项突破性大发3d: EvaGreen qPCR 染料和 Cheetah Taq hotstart DNA 聚合酶。因此,与其他商业化的 master mix 产品相比, Fast EvaGreen qPCR Master Mix 可以为客户带来更为精确的实验结果。

 



图 1. 比较 Biotium 公司 Fast EvaGreen Master Mix 产品和市场上其他两家主流公司( A:ABI 公司和 Q:Qiagen公司)生产的 SYBR Green master mix 产品在扩增人类基因组 DNA 的 ATPG 片断( 104 个核苷酸的片断,编码 ATP 基因)方面的效果。实验在同一块 PCR 板上进行,使用 ABI 7900 Fast 实时 PCR 仪, DNA 的上样量为分别为 200 ng , 20 ng , 2 ng , 200 pg , 20 pg 和 0 pg 。以不结合 DNA 的 ROX 染料作为参照计算最终的 ΔRn 值,从而真实地反映每种产品的荧光值变化。由于 Q 公司的 master mix 激活相对较慢,整块 PCR 板的激活条件都是 95°C 下 5 分钟。 PCR 循环为两步: 96 °C (5 s) 之后 60°C (30 s) 。 DNA 上样量为 200 ng 的扩增曲线被突出显示,以和其余上样量的结果相区别。左上方的小图显示的是放大以后基线附近的扩增情况,由于两种 基于 SYBR 的快速 master mix 产品扩增信号远远弱于 EvaGreen Master Mix ,放大以后能更好的观察扩增曲线。

EvaGreen Dye: EvaGreen 是 Biotium 公司的DNA 结合染料,它是一种同时适用于实时 PCR 和 高分辨率熔解曲线( HRM )分析的新一代染料。这种染料通过一种被称为“按要求释放”的全新机制,选择性的结合双链 DNA 。这一机制保证了较低的 PCR 抑制作用,同时也允许在染料饱和浓度以下进行高分辨率熔解曲线( HRM )分析。由于 EvaGreen 染料在光谱特性上类似于 FAM 以及 SYBR Green I ,因此 这种染料兼容所有商业化的 qPCR 仪器。此外,和 SYBR Green I 以及 SYBR GreenER 不同的是, EvaGreen 染料非常稳定且无致突变性和细胞毒性。

Cheetah Taq: Cheetah Taq 是Biotium公司的一种新型化学修饰的热启动 DNA 聚合酶。和 AmpliTaq Gold 不同的是, Cheetah Taq 在标准热启动条件下 (例如:使用 pH 8-9 Tris 缓冲液并置于 94°C), 仅需 2 分钟即可完全激活。而另一方面,与 Platinum Taq 等基于抗体大发3d的 热启动聚合酶相比, Cheetah Taq 在室温下完全没有活性,同时也降低了内在的 DNA 污染。此外,总体来说, Cheetah Taq 在 -20°C 和 4°C 时的稳定性都优于 AmpliTaq Gold,这也保证了产品在低温保存时仍能维持自身的高品质。

由拥有以上两项大发3d专利的Biotium公司生产的 Fast EvaGreen Master Mix 产品已经使用各种类型的扩增模版进行过测试,包括:短片断( <100 bp ),长片断( >700bp ),富含 AT 的片断,富含 GC 的片断以及基因组起始区。实验结果显示, Fast EvaGreen Master Mix 扩增效率优异,结果远优于其它供应商的基于 SYBR 的 master mix 产品。由于产品中的染料大发3d和酶大发3d都来源于Biotium公司,致使Biotium提供的 master mix 产品在价格上是最具竞争力的产品之一。Biotium公司的 master mix 产品以高品质和富有竞争力的价格,为客户提供了其他同类产品难以的价值。

 



图 2. 比较 Biotium 公司 Fast EvaGreen Master Mix 产品和市场上其他两家主流公司( Abi 公司和 Qiagen 公司)生产的 SYBR Green master mix 产品在扩增人类大脑 cDNA 的 B2M 片断( 71 个核苷酸的片断,编码 B2M 转录子)方面的效果。实验在同一块 PCR 板上进行,使用 ABI 7900 Fast 实时 PCR 仪, cDNA 的上样量为分别为 400 pg , 40 pg , 4 pg , 0.4 pg , 0.04 pg 和 0 pg 。以不结合 DNA 的 ROX 染料作为参照计算最终的 ΔRn 值,从而真实地反映每种产品的荧光值变化。由于 Q 公司的 master mix 激活相对较慢,整块 PCR 板的激活条件都是 95 oC 下 5 分钟。 PCR 循环为三步: 96°C 下 5 s ,之后 60°C 下 5 s ,接着 72°C 下 25 s 。左上方的小图显示的是放大以后基线附近的扩增情况,由于两种 基于 SYBR 的快速 master mix 产品扩增信号远远弱于 EvaGreen Master Mix ,放大以后能更好的观察扩增曲线。

使用效果

Fast EvaGreen Master Mix 产品已经使用各种类型的扩增模版进行过测试,包括:短片断( <100 bp ),长片断( >700bp ),富含 AT 的片断,富含 GC 的片断以及基因组起始区。实验结果显示, Fast EvaGreen Master Mix 扩增效率优异,结果优于其它供应商的基于 SYBR 的 master mix 产品。图 1 和图 2 分别比较了 Biotium 公司的 Fast EvaGreen Master Mix 产品和市场上其他两家主流公司( A 公司和 Q 公司)生产的基于 SYBR 的快速 qPCR master mix 产品在扩增人类基因组 DNA 和人类大脑 cDNA 方面的效果。结果显示, Fast EvaGreen Master Mix 的灵敏度远远高于其他两款产品,检测线性范围也更宽。特别是在扩增较为困难的人类基因组 DNA 方面, Fast EvaGreen Master Mix 的优势显示的更为明显(图 1 )。使用 EvaGreen Master Mix 获得的 Ct 值较小,线性检测范围达到了 5 个数量级,而使用 A 公司和 Q 公司的产品,特别是 A 公司的产品, Ct 值延后现象比较严重,线性范围变窄(对应的是图上两条曲线之间的距离不规则)。图 3 和图 4 显示,三种产品在融解曲线分析上的结果和上述 qPCR 的结果是一致的。 使用 Fast EvaGreen Master Mix 产品生成的融解曲线信号远远强于其他两种基于 SYBR 的快速 qPCR master mix 产品。

 

 
图 3. 比较 Fast EvaGreen Master Mix 产品和来自 A 公司以及 Q 公司的产品在融解曲线分析方面的表现。 分别 使用三种 产品对 200 ng 人类基因组 DNA 扩增后的样品 测定融解曲线 。扩增的详细信息参见图 1 中的描述。   图 4. 比较 Fast EvaGreen Master Mix 产品和来自 A 公司以及 Q 公司的产品在融解曲线分析方面的表现。 分别 使用三种 产品对 400 pg 人类大脑 cDNA 扩增的样品 测定融解曲线 。扩增的详细信息参见图 2 中的描述。

 

通用性

除了在 qPCR 方面的应用, Fast EvaGreen Master Mix 也能被用于高分辨率融解曲线分析( HRM )以及基于核苷酸探针的 qPCR 应用。 HRM 是一种最新发展出来的 DNA 分析大发3d,可用于检测点突变。由于 HRM 分析简单且成本低,这种方法的应用越来越广泛。要进行精确的 HRM 分析,首要的条件就是染料的浓度应该高于或远远高于 qPCR 所需最优的 SYBR Green I 或其他同类型 DNA 结合染料的浓度。

 



图 4. 使用包含 EvaGreen 染料和 NEP 标记的 AllGlo 探针(一种类似 TaqMan 的荧光探针)的 Fast EvaGreen Master Mix 分别扩增 B2M 基因片断和它的两个突变体(突变体 1 和突变体 2 )。突变体 1 在探针结合区域外有单一位点的点突变,突变体 2 的点突变则在探针结合区域中间。在每个反应中, EvaGreen 的信号(虚线)用绿色通道( FAM )纪录,同时探针的信号(实线)用红色通道( Cy5 )纪录。野生型(绿色)和突变体 1 (红色)能同时在 FAM 和 Cy5 通道收集到阳性信号。突变体 2 (蓝色)由于不能和探针结合,因此仅在 FAM 通道收集到阳性信号,而 Cy5 通道没有阳性信号。

因此,这些染料都无法用于制备同时适合 qPCR 和 HRM 的 master mix 产品。尽管目前市场上有一些声称同时适合 qPCR 和 HRM 的 master mix 产品使用了 SYBR 或其他类似染料,但由于需要在染料浓度上兼顾两种应用,它们的效果都不尽如人意。由于 EvaGreen 使用了创新设计的 “ 按要求释放 ”DNA 结合机制,它对 PCR 的抑制作用很低,在 qPCR 实验中可以使用较高的浓度以达到最大的荧光信号值。同时,这时候的染料浓度也能达到 HRM 分析所需的理想浓度,从而实现了一种 master mix 产品同时完美的适用于 qPCR 和 HRM 两种应用。

此外, Fast EvaGreen Master Mix 的另一项独创应用是在同一 qPCR 反应中同时使用 EvaGreen 和一种或多种核苷酸探针(例如: TaqMan 剖探针或者 AlleLogic Biosciences 公司的 AllGlo 探针)。在这项应用中, EvaGreen 染料使用绿色通道检测总的 DNA 生成,而核苷酸探针可以在红色通道同时检测每个目标片断的扩增情况。更重要的是, PCR 之后还可以进行融解曲线分析,以确定有几种片断被成功扩增。

 
图 5. 对图 4 中的产物进行高分辨率融解曲线分析( HRM )。用归一化的荧光值对温度作图(左图),以及用荧光值的导数对温度作图(右图)。两张图上对于同一基因型都仅绘出了一条具有代表性的曲线。 HRM 成功地分析出了所有的三种基因型。

Table A. 订货信息

Cat#
Product Name
Unit Size Unit Price 促销价 品 牌
31003
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix (200 rxn)
2 x 1mL
¥1482
¥917 美国Biotium
31003-2
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix (5,000 rxn)
50 x 1mL
¥29400
¥ 美国Biotium
31003-1
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix (500 rxn)
5 x 1mL
¥3234
¥2246 美国Biotium
31003-T
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix (trial size, 100 rxn)
1 x 1mL
¥706
¥ 美国Biotium
31015
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix -High Rox (200 rxn)
2 x 1mL
¥1705
¥ 美国Biotium
31015-2
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix -High Rox (5,000 rxn)
50 x 1mL
¥33810
¥ 美国Biotium
31015-1
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix -High Rox (500 rxn)
5 x 1mL
¥3716
¥ 美国Biotium
31015-T
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix -High Rox (trial size, 100 rxn)
1 x 1mL
¥811
¥ 美国Biotium
31014
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix -Low Rox (200 rxn)
2 x 1mL
¥1705
¥ 美国Biotium
31014-2
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix -Low Rox (5,000 rxn)
50 x 1mL
¥33810
¥ 美国Biotium
31014-1
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix -Low Rox (500 rxn)
5 x 1mL
¥3716
¥ 美国Biotium
31014-T
Fast EvaGreen® qPCR Master Mix -Low Rox (trial size, 100 rxn)
1 x 1mL
¥811
¥ 美国Biotium





猜你喜欢